乙醇酸氧化酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循环中的一种酶，也是植物光呼吸代谢中的关键酶，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通过测定乙醇酸氧化酶活性，可以了解植物光合和呼吸代谢的基本方法。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在nm有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂二：临用前加入6mL双蒸水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
操作步骤(仅供参考)：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后g，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。
细胞或细菌：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1.紫外分光光度计30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.将试剂一25℃预热15min。
3.样本测定：1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：
三、GO酶活计算
1.按蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。
GO酶活（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×Cpr）÷T=.16×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算
酶活定义：每克组织每分钟生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。
GO酶活（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×W÷V样总）÷T=.16×ΔA÷W
3.按细胞数量计算
酶活定义：每万细胞每分钟生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。
GO酶活（U/cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×÷V样总）÷T=0.×ΔA
ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.L；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，3min；：万个细胞；：单位换算系数，1mol=nmol。
注意事项：
1.测定之前进行预实验，若吸光值A11，请将样本用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.色素含量较高的样本，可在提取酶时加活性炭吸附。
3.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，其OD值变化不超过0.02。